一、產(chǎn)品介紹

二、酶活測(cè)定方法

1.     原理

利用DNase降解DNA生成寡核苷酸時(shí)260nm處的吸光值會(huì)升高的原理，在一定條件下，OD260每分鐘的增加率與DNase的含量成正比例。以牛胸腺DNA為底物，在pH5.0、25℃條件下，1Kunitz unit能使OD₂₆₀每分鐘增加0.001。

2.     測(cè)活試劑

2.1 1M 醋酸鈉緩沖液 (pH 5.0)：將13.6g醋酸鈉溶于80ml去離子水，再用6M HCl調(diào)pH 5.0（25℃），加去離子水定容至100ml，室溫保存。

2.2 100mM MgSO₄：將1.2g MgSO₄溶于100ml去離子水，室溫保存。

2.3 0.033% (W/V)小牛胸腺DNA

1）將100mg 小牛胸腺DNA（欣經(jīng)科 貨號(hào)：7026）溶于300ml預(yù)冷的去離子水中，冰浴至少30min，緩慢攪拌至完全溶解。分裝后，凍存于-20℃。臨用前在37℃解凍。

2）測(cè)定DNA的濃度

a. 用去離子水將1.1.3底物DNA樣品稀釋N倍（10-30倍），以去離子水作為陰性對(duì)照。

b. 用UV分光光度儀測(cè)定OD₂₆₀，以陰性對(duì)照歸零。

c.  1個(gè)OD₂₆₀單位相當(dāng)于50μg/ml DNA，DNA濃度的計(jì)算公式如（1.1）。

         （1.1）

2.4 酶稀釋液：即0.85% NaCl（150mM）。將0.85g NaCl溶于100ml去離子水，室溫保存。

2.5 反應(yīng)液R

    1）按下表配置50ml 反應(yīng)液R。

    2）輕柔混勻后，用0.1M HCl和0.1M NaOH調(diào)pH 5.0 (25oC)。2-8℃可穩(wěn)定保存至少2個(gè)月。

3）*注意：根據(jù)4.3測(cè)得的DNA濃度適當(dāng)添加去離子水和底物DNA。測(cè)活試劑R中DNA的終濃度為0.004%(w/v) ，即40ug/ml，OD₂₆₀吸光值為0.8。

1.     待測(cè)樣品的配制

測(cè)活前，用酶稀釋液溶解重組型bpDNase I干粉后，再用酶稀釋液將酶液稀釋至200-500 Kuniz units/ml，按以下步驟檢測(cè)酶活。

2.     酶活檢測(cè)步驟

在1cm的石英比色杯中加入2.5ml 2.2.2測(cè)活試劑R，25℃條件下保溫1.5min后，加0.5ml待測(cè)樣品，迅速混勻，在260nm波長(zhǎng)下讀取2min內(nèi)最大的吸光度變化率（ΔA₂₆₀nm/min _Sample）。同時(shí)以0.5ml去離子為空白對(duì)照，記錄ΔA₂₆₀nm/min _Blank。按照以下公式計(jì)算酶活力。線性范圍是400-500U/ml。3.00ml反應(yīng)體系含83mM 醋酸鈉緩沖液(pH5.0)，4.2mM MgSO4，25mM NaCl，33.33ug/ml小牛胸腺DNA及200-250 Kuniz units DNase I。酶活力計(jì)算公式：

Activity（Kunitz Units/ml）= (ΔA₂₆₀nm/min _Sample -ΔA₂₆₀nm/min _Blank) X (3) X D =△A/min×6000×D

0.001×0.5×1

 三、酶性質(zhì)